低温研磨机正确的实验步骤分享

　　低温研磨机又叫全自动多样品冷冻研磨仪，和液氮粉碎机类似，原理就是先把常温下呈韧性、难以粉碎的物质，冷冻到脆化点以下，然后在低温研磨机内被研磨到所需的细度，而且原成分不会破坏。并且在常温下易燃易爆的物质，也能低温粉碎，效果更为显著。

　　工作原理：

　　低温研磨机利用低温冻结力，机械撞击力，物里摩擦力将样品磨碎。

　　系统构成：

　　低温研磨机拥有五大系统，样本研磨系统、液氮贮存系统、液氮控制系统、电路控制系统、保温及保冷系统。

　　应用范围：

　　低温研磨机广泛运用于生物/食物/农业/医药品/化学/合成材料/工程/电子/建筑原料/玻璃/陶瓷等行业。

　　低温研磨机实验步骤：

　　1、先将低温研磨机上的制冷模块预先置于-20℃，使用时取出安装好。将研磨珠去RNA酶处理。

　　2、随机抽取小鼠的尾巴100μg，把样本剪成尽可能小段，置于无RNA酶的2研磨单位离心管中（选择耐液氮冷冻管子），同时加入1颗5号研磨珠和2颗3号研磨珠（如果选择1.5研磨单位离心管，只需要加入4-5颗3号研磨珠）。

　　3、放置于液氮中一起浸泡3分钟，取出放置于预冷模块中，在低温研磨机上选择13单位频振研磨60s。（该步骤可以根据研磨的细微程度要求可以再重复一遍）。

　　4、把研磨好的样本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus（此处选择PBS，可以根据实验需要加入其他提取液，如1ml TRIzol等），继续置于低温研磨机上选择13单位频振研磨60s。样本将处于糊状。（其他提取试剂有可能会出现泡沫，不影响实验）。

　　5、取出研磨管，放入冷冻离心机中，于4度，12000g离心10分钟。

　　6、小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨单位离心管中，盖上管盖，在室温上孵育15分种，使样品充分裂解至匀浆液较透明，如果仍有少量颗粒属于正常情况，不影响RNA提取质量和得率。

　　7、在研磨单位离心管中加入0.02ml氯，盖紧管盖，振荡混匀并将其在冰上孵育15分种，于4度，12000g离心15分钟。离心后混合物分层：上清层，中间层，下层；RNA存在于上清层中。

　　8、将上清层小心转移到一干净的离心管中，加入等体积冰浴的异丙醇，颠倒振荡混匀，将混合的样品在-20度条件，孵育20分种，于4度，12000g离心10分钟。RNA沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。小心弃去上清，用1ML的冰浴75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，颠倒洗涤低温研磨机的离心管管壁，并旋涡振荡样品，尽可能让沉悬浮，于4度，12000g离心5分钟，再次去除上清，晾干沉淀。

　　10、在阴凉处适度干燥RNA沉淀（避免过分干燥，那样会降底它的可溶性）。

　　11、低温研磨机用适量（一般可用0.01—0.02ml）的无RNA酶水或TE溶液来溶解RNA。抽提好的RNA，保存于-70度。